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      免費代測人干擾素-αELISA檢測試劑盒

      發(fā)布時間: 2012-08-10  點擊次數(shù): 1472次

      人干擾素-αELISA檢測試劑盒            

      本試劑僅供研究使用  標本:血清

      試驗原理:
          IFN-α試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知IFN-α濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將IFN-α和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IFN-α的濃度呈比例關系。

      自備材料
      蒸餾水。
      加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
      振蕩器及磁力攪拌器等。

      安全性
      避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
      實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
      不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

      人干擾素-αELISA檢測試劑盒 

      操作注意事項
      試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
      實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
      不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
      使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
      使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
      洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
      底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
      加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
      按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

      樣品收集、處理及保存方法
      血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
      血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
      細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
      保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

      洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

      人干擾素-αELISA檢測試劑盒 

      操作步驟
      使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
      根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
      加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
      甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
      每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
      甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
      每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
      取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
      在450nm波長處測定各孔的OD值。

      6號標準品以上的結果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。

      試劑盒性能
      1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
      2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
      3. 重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于10%。

      人干擾素-αELISA檢測試劑盒 

      結 果 判 斷 與 分 析
      1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

      2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的IFN-α標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的IFN-α含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

      3、檢測值范圍:0-800pg/ml

      4、敏感度: 1.0 pg/ml

      Zincon 鋅試劑 [56484-13-0] 25g
      Cibacron blue 3G-A 汽巴藍 [84166-13-2] 25g
      m-Xylene 1,3-二甲苯 [108-38-3] 500ml
      p-Xylene 1,4-二甲苯 [106-42-3] 500ml
      Xylene cyanol FF 二甲苯青 FF [2650-17-1] 5g
      Xylene cyanol FF 二甲苯青 FF [2650-17-1] 5g
      Xylenol blue 二甲苯酚藍 [125-31-5] 10g
      Xylenol orange 二甲酚橙 [3618-43-7] 10g
      Xylitol 木糖醇 [87-99-0] 100g
      D(+)-Xylose D(+)-木糖 [58-86-6] 100g
      Zearalenone from Giberella zeae 玉米烯酮 [17924-92-4] 25mg
      Zeatin 玉米素 [13114-27-7] 100mg
      trans-Zeatin 反玉米素 [1637-39-4] 100mg
      trans-Zeatin riboside 反式-玉米素核苷 [6025-53-2] 100mg
      Zeaxanthin from Penicillium simplicissimum 玉米黃質 [144-68-3] 1mg
      Zeocin 抗菌防腐劑 [181494-14-4] 100mg
      Zinc sheets 鋅片 [7440-66-6] 250g
      Zinc granules 鋅片 [7440-66-6] 250g
      Zinc acetate, dihydrate 乙酸鋅二水 [5970-45-6] 250g
      Zinc acetate anhydrate 乙酸鋅無水 [557-34-6] 250g
      Zinc bromide anhydrous 溴化鋅 [7699-45-8] 100g
      Zinc carbonate basic 堿式碳酸鋅 [5263-02-5] 250g

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